細(xì)胞自噬是幾乎所有哺乳動(dòng)物細(xì)胞正常運(yùn)行所必需的分解代謝過(guò)程，在細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)態(tài)的維持、胚胎發(fā)育、天然免疫、衰老等生理過(guò)程中扮演著重要角色。同時(shí)，細(xì)胞自噬的功能異常與大量人類疾病相關(guān)，如癌癥和神經(jīng)退行性疾病等。TAX1BP1作為可結(jié)合泛素的多功能自噬受體蛋白，在降解入侵病原體、蛋白聚集體、受損溶酶體等選擇性自噬過(guò)程中發(fā)揮重要作用。

中國(guó)科學(xué)院上海有機(jī)化學(xué)研究所生命過(guò)程小分子調(diào)控全國(guó)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室潘李鋒課題組，致力于TAX1BP1等自噬受體蛋白的結(jié)構(gòu)和作用機(jī)制的研究。前期，該課題組闡明了自噬受體蛋白TAX1BP1識(shí)別泛素蛋白、腳手架蛋白NAP1和分子馬達(dá)蛋白Myosin VI相關(guān)的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)與分子機(jī)制。

近期，潘李鋒課題組在《美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院刊》（PNAS）上，在線發(fā)表了題為Mechanistic insights into the interactions of?TAX1BP1?with RB1CC1 and mammalian ATG8 family proteins的研究論文。該團(tuán)隊(duì)利用核磁共振、等溫量熱滴定、光譜位移等實(shí)驗(yàn)方法，探究了自噬受體蛋白TAX1BP1與自噬起始ULK復(fù)合物亞基RB1CC1之間的相互作用，首次發(fā)現(xiàn)了TAX1BP1采用雙位點(diǎn)作用的模式結(jié)合RB1CC1。除已知的TAX1BP1的SKICH結(jié)構(gòu)域能結(jié)合RB1CC1的coiled-coil結(jié)構(gòu)域外，TAX1BP1的coiled-coil結(jié)構(gòu)域亦可以與RB1CC1的C端區(qū)域發(fā)生相互作用，且RB1CC1的兩個(gè)結(jié)合位點(diǎn)在結(jié)合TAX1BP1時(shí)不采用協(xié)同的作用模式。因此，RB1CC1和TAX1BP1之間的雙位點(diǎn)結(jié)合模式賦予了RB1CC1和TAX1BP1形成動(dòng)態(tài)寡聚物的能力。進(jìn)而，利用X射線單晶衍射技術(shù)，該團(tuán)隊(duì)首次解析了TAX1BP1SKICH/RB1CC1 coiled-coil復(fù)合物的晶體結(jié)構(gòu)，并基于團(tuán)隊(duì)此前解析的TAX1BP1的SKICH結(jié)構(gòu)域結(jié)合NAP1的復(fù)合物結(jié)構(gòu)，發(fā)現(xiàn)了TAX1BP1的SKICH結(jié)構(gòu)域采用不同的區(qū)域和作用模式去結(jié)合RB1CC1和NAP1。后續(xù)研究表明，RB1CC1的coiled-coil和NAP1的coiled-coil通過(guò)別構(gòu)效應(yīng)競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合TAX1BP1的SKICH結(jié)構(gòu)域，同時(shí)，NAP1的FIR模序的引入可以介導(dǎo)穩(wěn)定的RB1CC1/TAX1BP1/NAP1三元六聚復(fù)合物的形成。進(jìn)一步通過(guò)相關(guān)的生化實(shí)驗(yàn)，該團(tuán)隊(duì)證實(shí)RB1CC1/TAX1BP1/NAP1三元復(fù)合物的結(jié)合模式為NAP1通過(guò)其FIR模序和N端的coiled-coil結(jié)構(gòu)域同時(shí)招募RB1CC1和TAX1BP1，以及TAX1BP1/NAP1/RB1CC1三元復(fù)合物可進(jìn)一步與TBK1激酶組裝形成四元復(fù)合物。此外，該研究首次解析了TAX1BP1的非經(jīng)典LIR（CLIR）基序結(jié)合哺乳動(dòng)物ATG8家族蛋白GABARAP的復(fù)合物結(jié)構(gòu)，剖析了TAX1BP1通過(guò)其CLIR模序選擇性識(shí)別ATG8家族蛋白的分子機(jī)制。該團(tuán)隊(duì)發(fā)現(xiàn)單獨(dú)的TAX1BP1、TAX1BP1/RB1CC1二元復(fù)合物、TAX1BP1/NAP1/RB1CC1三元復(fù)合物與ATG8家族蛋白的結(jié)合能力不同，并通過(guò)相關(guān)的生化實(shí)驗(yàn)和結(jié)構(gòu)建模探討了潛在機(jī)制。

該研究探索了自噬受體蛋白TAX1BP1結(jié)合ATG8家族蛋白以及自噬起始ULK復(fù)合物亞基RB1CC1的分子機(jī)制及其相關(guān)的蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)，從結(jié)構(gòu)角度首次揭示了TAX1BP1結(jié)合ATG8家族蛋白和RB1CC1的獨(dú)特分子機(jī)制，并闡釋了TAX1BP1、RB1CC1、NAP1、ATG8家族蛋白之間的相互關(guān)系。研究表明，自噬受體蛋白TAX1BP1在識(shí)別泛素化自噬底物后可能先通過(guò)雙位點(diǎn)模式結(jié)合RB1CC1進(jìn)而招募ULK復(fù)合物。其中，TAX1BP1和RB1CC1之間的相互作用，不僅阻礙TAX1BP1的CLIR基序與ATG8家族蛋白的結(jié)合，而且可能導(dǎo)致ULK復(fù)合物寡聚并激活ULK復(fù)合物，從而原位誘導(dǎo)自噬前體產(chǎn)生。進(jìn)一步，TAX1BP1通過(guò)NAP1蛋白招募NAP1/TBK1復(fù)合物。其中，NAP1的引入將導(dǎo)致TAX1BP1和RB1CC1之間的相互作用發(fā)生重排，形成ULK/TAX1BP1/NAP1/TBK1超級(jí)復(fù)合物，并釋放TAX1BP1的CLIR基序去結(jié)合錨定在自噬前體膜上的ATG8家族蛋白，促進(jìn)后續(xù)自噬體的形成。該成果從生化和結(jié)構(gòu)角度對(duì)TAX1BP1、NAP1、RB1CC1、ATG8家族蛋白間相互作用的分子機(jī)制提出了新見(jiàn)解，擴(kuò)展了領(lǐng)域內(nèi)對(duì)于自噬受體蛋白TAX1BP1介導(dǎo)的選擇性自噬過(guò)程的分子機(jī)制的認(rèn)識(shí)。

研究工作得到國(guó)家自然科學(xué)基金、國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃、中國(guó)科學(xué)院青年交叉團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目，以及上海市科學(xué)技術(shù)委員會(huì)和生命過(guò)程小分子調(diào)控全國(guó)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室的支持。

論文鏈接

TAX1BP1結(jié)合RB1CC1和ATG8家族蛋白的分子機(jī)制

TAX1BP1在選擇性自噬過(guò)程中招募ULK、TBK1復(fù)合物及ATG8家族蛋白的工作模式圖